Plasmide CRISPR/Cas9 KO Gads (m): sc-421689

Présentation

Grap2 code pour la protéine adaptatrice Gads, un composant de signalisation hématopoïétique qui relie les récepteurs immunitaires activés aux voies effectrices en aval. Dans les cellules T, Gads couple LAT phosphorylée à SLP-76 afin d’assembler des micro-amas de signalisation qui propagent la signalisation proximale du récepteur des cellules T (TCR), facilitant l’activation de PLCγ1, le flux calcique, la signalisation MAPK et des programmes transcriptionnels contrôlant la production de cytokines et la prolifération. Cette protéine adaptatrice participe également à la signalisation d’autres immunorécepteurs dans les lignées lymphoïdes, influençant les seuils d’activation cellulaire et l’organisation de la synapse immunologique. Les réseaux de signalisation dépendants de Gads, lorsqu’ils sont dérégulés, sont fréquemment étudiés dans des modèles de dysfonctionnement immunitaire, de phénotypes inflammatoires et d’anomalies de la signalisation hématopoïétique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Gads (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Grap2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Grap2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Grap2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Gads.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Grap2 pour l'étude de la signalisation de Gads, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Grap2 essentiels à la fonction de Gads
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Grap2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Gads plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Gads plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Grap2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Gads plasmide HDR (m) et le Gads (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Grap2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Grap2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.