FUT2 CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-409559-ACT-2

ヒトFUT2はα(1,2)-フコース転移酵素2（FUT2）をコードしており、これはゴルジ体に局在する糖転移酵素として糖鎖の末端フコシル化を触媒し、粘膜表面や分泌性糖タンパク質上にH type 1をはじめとする関連フコシル化エピトープを形成する。FUT2は分泌型（secretor）ステータスを規定することで、分泌物中のABO抗原提示、上皮バリアの生物学、ならびに粘膜免疫やマイクロバイオーム組成を形作る宿主—微生物相互作用など、糖鎖依存的な過程を調節する。FUT2活性の遺伝的多型や喪失は、感染に対する感受性や炎症性表現型の変化と関連し、炎症性腸疾患リスク、ノロウイルス感受性、微生物叢の群集構造のシフトといった形質とも結び付けられている。さらに、FUT2の遺伝子編集や機能撹乱は、糖鎖修飾経路の解明、レクチンや病原体の結合決定因子のマッピング、そして粘膜フコシル化が免疫シグナル伝達や上皮生理に及ぼす影響をヒト細胞系でモデル化するために用いられている。

FUT2 CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FUT2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FUT2 CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における FUT2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFUT2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FUT2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFUT2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFUT2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFUT2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFUT2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。