FucT-IX CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420427

概要

マウスFut9は、フコシルトランスフェラーゼIX（FucT-IX）をコードしており、ゴルジ体に局在するα1,3-フコシルトランスフェラーゼとして、N-グリカンや糖脂質の末端フコシル化を触媒し、ルイスXに代表されるルイス型エピトープの合成に寄与します。この糖鎖付加活性は、膜タンパク質と細胞外リガンドの糖鎖依存的相互作用を形作ることで、細胞間接着、受容体輸送、およびシグナル伝達を調節します。Fut9依存的なフコシル化は、糖鎖モチーフが白血球の接着や組織パターニングを制御する発生プログラムや免疫関連過程の文脈で、しばしば研究対象となります。フコシル化パターンの異常やルイス抗原発現の変化は、炎症やがん化（腫瘍性形質転換）のモデルにおいて分子レベルの指標として用いられることもありますが、臨床的有用性を示唆するものではありません。

FucT-IX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるFut9遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Fut9内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Fut9のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FucT-IXタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FucT-IXシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Fut9欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FucT-IXの機能に不可欠なFut9エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Fut9ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FucT-IX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびFucT-IX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Fut9遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FucT-IX HDRプラスミド（m）および FucT-IX HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFut9ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFut9標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。