FucT-IX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420427

Übersicht

Das Mausgen **Fut9** kodiert die Fucosyltransferase IX (FucT‑IX), eine im Golgi lokalisierte α1,3‑Fucosyltransferase, die die terminale Fucosylierung von N‑Glykanen und Glykolipiden katalysiert und damit zur Synthese Lewis‑ähnlicher Epitope wie **Lewis X** beiträgt. Diese Glykosylierungsaktivität moduliert Zell‑Zell‑Adhäsion, Rezeptortransport und Signaltransduktion, indem sie die glyk(an)abhängigen Interaktionen von Membranproteinen und extrazellulären Liganden prägt. Die Fut9‑abhängige Fucosylierung wird häufig im Kontext von Entwicklungsprogrammen und immunbezogenen Prozessen untersucht, in denen Glykanmotive die Leukozytenadhäsion und die Gewebemusterung regulieren. Fehlregulierte Fucosylierungsmuster und eine veränderte Lewis‑Antigen‑Expression werden zudem als molekulare Ausleseparameter in Modellen von Entzündung und onkogener Transformation verwendet, ohne dass damit eine klinische Nutzbarkeit impliziert wird.

Das FucT-IX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Fut9-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Fut9-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Fut9 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FucT-IX-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Fut9-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FucT-IX-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Fut9-Exone abzielen, die für die FucT-IX-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Fut9-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FucT-IX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom FucT-IX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Fut9-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FucT-IX HDR-Plasmid (m) und FucT-IX HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Fut9-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Fut9-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.