Plasmide CRISPR/Cas9 KO FTSJ1 (h): sc-411789

Présentation

FTSJ1 code une ARN 2′-O‑méthyltransférase conservée, dépendante de la S‑adénosyl‑L‑méthionine, qui modifie des ARNt spécifiques afin de soutenir un décodage fidèle et une traduction efficace. En façonnant les paysages de modification des ARNt, FTSJ1 influence la protéostasie, les réponses au stress et le contrôle global de la synthèse protéique, en interaction avec la fonction ribosomique et les voies de contrôle qualité de la traduction. Une perturbation de l’activité de FTSJ1 a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux, et des variants pathogènes sont liés à une déficience intellectuelle liée à l’X, soulignant son importance dans les programmes d’expression génique neuronaux. Des états de modification des ARNt altérés, associés à FTSJ1, peuvent également affecter la croissance et la différenciation cellulaires via des effets en aval sur la fidélité de la traduction.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FTSJ1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FTSJ1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FTSJ1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FTSJ1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FTSJ1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FTSJ1 pour l'étude de la signalisation de FTSJ1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FTSJ1 essentiels à la fonction de FTSJ1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FTSJ1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FTSJ1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FTSJ1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FTSJ1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FTSJ1 plasmide HDR (h) et le FTSJ1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FTSJ1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FTSJ1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.