Plasmide CRISPR d'Activation (h) Freud-1: sc-408241-ACT

Le gène humain **CC2D1A** code **Freud-1**, une protéine régulatrice contenant des domaines *coiled-coil* et C2, qui agit comme modulateur transcriptionnel se liant à l’ADN et comme échafaudage de signalisation. Freud-1 a été impliquée dans le contrôle de programmes géniques sérotoninergiques et dopaminergiques, notamment via la régulation des promoteurs de gènes de récepteurs, et participe à des processus cellulaires tels que l’équilibre entre répression et activation transcriptionnelles, la différenciation neuronale et la signalisation synaptique. **CC2D1A** interfère également avec des voies de signalisation associées à la membrane, dont la signalisation liée à Akt, ce qui concorde avec des rôles dans la survie cellulaire et les réponses au stress. Une activité altérée de CC2D1A/Freud-1 a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ce qui étaye sa pertinence pour des études mécanistiques de la régulation génique neuronale.

Freud-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CC2D1A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Freud-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CC2D1A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CC2D1A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Freud-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CC2D1A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Freud-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Freud-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CC2D1A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.