FOXJ1CRISPR激活质粒(h): sc-402226-ACT

人类 FOXJ1 编码一种叉头框（forkhead box）转录因子，作为运动纤毛发生（motile ciliogenesis）的主调控因子，协调基底体对接、轴丝组装，以及多纤毛细胞分化所需的转录程序。FOXJ1 的活性与发育信号传导和上皮分化通路相互衔接，其中包括塑造气道与室管膜细胞身份的纤毛相关转录网络。FOXJ1 表达或纤毛基因程序的失调与黏液纤毛清除功能受损及更广泛的纤毛病（ciliopathy）相关表型有关，因此与呼吸道上皮、生殖道功能以及脑脊液稳态等研究密切相关。作为一种核内 DNA 结合蛋白，FOXJ1 是一个便于操作的关键节点，可用于探究对纤毛基因的转录调控如何影响屏障功能、液体流动以及先天防御机制。

FOXJ1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性FOXJ1的表达。

FOXJ1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的FOXJ1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于FOXJ1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性FOXJ1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的FOXJ1位点，并能够研究内源性位点上依赖于FOXJ1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在FOXJ1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟FOXJ1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。