FOXC1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403113-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- FOXC1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- FOXC1ダブルニカースプラスミド（h）およびFOXC1ダブルニカースプラスミド（h2）は、FOXC1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: FOXC1 抗体 (4D11): sc-293455
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
FOXC1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-403113-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FOXC1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-403113-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FOXC1（forkhead box C1）は、翼状ヘリックス型の転写因子であり、胚発生、細胞運命の規定、組織パターニングを制御する遺伝子発現プログラムを調節する。とりわけ、眼の前眼部形成、頭蓋顔面の形態形成、血管生物学において重要な役割を担う。配列特異的なDNA結合を介して、FOXC1はTGF-β/BMPやWntなどの発生シグナル伝達経路と交差する転写ネットワークを統合し、系譜選択や細胞外マトリックスのリモデリングを形作る。FOXC1活性の異常は、Axenfeld–Riegerスペクトラム表現型を含む先天性前眼部形成異常（前眼部異形成）と関連付けられており、さらに複数のがんで観察される異常な転写状態にも寄与することが示されている。細胞モデルでは、FOXC1は上皮間葉転換（EMT）、幹細胞様表現型、および状況依存的な増殖・遊走・ストレス応答への影響という観点から研究されることが多い。
FOXC1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FOXC1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FOXC1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FOXC1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FOXC1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。