FNBP4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408501-ACT

FNBP4（formin binding protein 4）は細胞質のアダプター分子であり、プロリンリッチ配列やSH3ドメインをもつ相互作用パートナーとの結合を介して、膜動態とアクチン細胞骨格のリモデリングを結び付ける役割に関与するとされています。シグナル伝達複合体をエンドサイトーシスおよび細胞骨格の機構へ連結することで、FNBP4は小胞輸送、細胞形態の変化、移動プログラムに影響を及ぼし得ます。これらの過程の制御異常は、増殖や浸潤の異常表現型としばしば関連するため、FNBP4は、がんや細胞骨格制御の破綻を伴う他の疾患におけるシグナル経路の再配線を研究するうえで重要なノードとなります。FNBP4の機能解析は、アクチン依存性シグナル伝達、膜輸送、ならびにこれらの経路によって駆動される状況特異的な転写出力の機序研究を支えます。

FNBP4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FNBP4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FNBP4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FNBP4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFNBP4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FNBP4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFNBP4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFNBP4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFNBP4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFNBP4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。