Plasmide CRISPR/Cas9 KO FKBP6 (h): sc-406798

Présentation

FKBP6 code la protéine de liaison au FK506 6, une immunophiline dotée d’une activité peptidyl‑prolyl cis–trans isomérase, qui favorise le repliement des protéines et leur maturation dépendante de chaperons dans le cytoplasme et le noyau. Dans la lignée germinale, FKBP6 est impliquée dans la progression de la méiose et le fonctionnement du complexe synaptonémal, en coordonnant les interactions protéine‑protéine nécessaires à l’appariement des homologues et à la recombinaison. La perturbation de FKBP6 a été associée à des défauts de spermatogenèse et à des phénotypes d’infertilité masculine, ce qui en fait un point d’entrée utile pour l’étude de la biologie de la reproduction et du contrôle qualité associé à la méiose. Ses rôles moléculaires s’inscrivent aussi dans des réseaux plus larges de protéostasie régulés par les immunophilines et des complexes associés à HSP90, qui influencent la stabilité et le trafic des protéines clientes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FKBP6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FKBP6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FKBP6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FKBP6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FKBP6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FKBP6 pour l'étude de la signalisation de FKBP6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FKBP6 essentiels à la fonction de FKBP6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FKBP6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FKBP6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FKBP6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FKBP6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FKBP6 plasmide HDR (h) et le FKBP6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FKBP6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FKBP6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.