Plasmide Double Nickase (h) FKBP2: sc-409613-NIC

FKBP2 code la protéine de liaison au FK506 2 (FK506-binding protein 2), une peptidyl-prolyl cis–trans isomérase résidente du réticulum endoplasmique (RE) qui agit comme chaperon moléculaire pour soutenir le repliement et le contrôle qualité des protéines sécrétoires et membranaires. En tant que membre de la famille des immunophilines, FKBP2 contribue à la protéostasie du RE et s’intègre aux voies de signalisation de la réponse aux protéines mal repliées (UPR) ainsi qu’aux voies de dégradation associée au RE (ERAD) lors du stress cellulaire. La perturbation de la capacité chaperonne du RE et de la dynamique de repliement régulée par les immunophilines est pertinente pour des mécanismes impliqués dans les maladies liées au mauvais repliement des protéines et dans des phénotypes d’adaptation au stress dans les cellules humaines. FKBP2 est donc fréquemment étudiée dans le contexte de la régulation de la voie sécrétoire, de l’homéostasie du RE liée au redox et au calcium, et de la modulation de la maturation des protéines.

FKBP2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FKBP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FKBP2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FKBP2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FKBP2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.