Plasmide Double Nickase (h) FKBP11: sc-405563-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) FKBP11 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FKBP11 Double Nickase (h) et le plasmide FKBP11 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FKBP11. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: FKBP11 Antibody (D-3): sc-398700
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) FKBP11 | sc-405563-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) FKBP11 | sc-405563-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FKBP11 code un membre de la famille des protéines se liant au FK506, localisé dans le réticulum endoplasmique, doté d’une activité d’isomérase peptidyl-prolyl cis–trans qui soutient le repliement des protéines et le contrôle qualité dans la voie de sécrétion. Il est enrichi dans les états cellulaires sécrétant des anticorps et, plus généralement, dans d’autres états hautement sécrétoires, où il contribue à la protéostasie du RE, au repliement des polypeptides naissants et à la coordination de la signalisation de la réponse aux protéines mal repliées (UPR). Par ces fonctions, FKBP11 est associé à l’adaptation cellulaire au stress du RE ainsi qu’à la régulation de la maturation et du trafic des protéines. Un dérèglement de l’homéostasie du RE impliquant FKBP11 a été étudié dans des contextes d’inflammation chronique, de différenciation des cellules immunitaires et de physiopathologie liée au stress, où la charge sécrétoire et la capacité de protéostasie sont modifiées.
FKBP11 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FKBP11 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FKBP11. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FKBP11. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FKBP11.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.