Filensin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419323

概要

Bfsp1 は、レンズ線維細胞で豊富に発現する中間径フィラメントタンパク質フィレンシンをコードしており、ファキニン（BFSP2）とヘテロ重合してビーズ状フィラメントを形成します。この細胞骨格ネットワークはレンズ線維細胞の構築を支え、終末分化に伴う無細胞小器官領域（organelle-free zone）の形成に寄与し、さらに膜—細胞骨格相互作用を安定化することで屈折の透明性維持を助けます。ビーズ状フィラメントの組み立てが破綻するとレンズの力学特性やタンパク質恒常性（プロテオスタシス）が乱れ、BFSP1 に関連するフィラメント異常が白内障関連表現型、ならびに細胞骨格の組織化、タンパク質凝集、細胞ストレス応答を制御するより広範な経路と結び付くことが示唆されます。

Filensin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるBfsp1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Bfsp1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Bfsp1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Filensinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Filensinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Bfsp1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Filensinの機能に不可欠なBfsp1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Bfsp1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Filensin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびFilensin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Bfsp1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Filensin HDRプラスミド（m）および Filensin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはBfsp1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のBfsp1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。