Fibromodulin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401610-ACT

FMOD codifica a fibromodulina, um pequeno proteoglicano secretado rico em leucina, enriquecido em tecidos conjuntivos, onde se liga a colágenos fibrilares e regula a organização da matriz extracelular. A fibromodulina contribui para a fibrilogênese do colágeno, a montagem da matriz e a mecanobiologia, influenciando programas de adesão celular, migração e remodelação tecidual. Por meio de suas interações com componentes da matriz e com a sinalização de fatores de crescimento, como vias ligadas ao TGF-β, a FMOD pode modular o comportamento de fibroblastos e respostas do estroma. A expressão alterada de FMOD e a remodelação da matriz estão associadas a fenótipos fibróticos e à dinâmica do microambiente tumoral, tornando-a um alvo útil para estudar mecanismos de doença impulsionados pela MEC.

Fibromodulin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FMOD sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Fibromodulin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FMOD em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FMOD, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Fibromodulin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FMOD nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Fibromodulin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Fibromodulin em células tumorais com expressão de FMOD silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.