FHOD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-432529

Übersicht

Fhod3 kodiert FHOD3, ein diaphanous-verwandtes Formin, das lineare Aktinfilamente nucleiert und verlängert und damit den Umbau des Aktin-Zytoskeletts sowie die kontraktile Organisation unterstützt. In quergestreifter Mausmuskulatur ist FHOD3 in sarkomerischen Strukturen angereichert und trägt über Rho-GTPase-regulierte Aktindynamik zur Myofibrillenassemblierung, zur Bildung von Stressfasern und zur Aufrechterhaltung der zellulären Architektur bei. Diese Prozesse überschneiden sich mit Signalwegen, die Mechanotransduktion, Zellform und die intrazelluläre Kraftübertragung steuern, wodurch FHOD3 ein nützlicher Ansatzpunkt für die Untersuchung der Zytoskelett-Homöostase ist. Eine fehlregulierte Aktinorganisation und beeinträchtigte Sarkomerintegrität sind mit Kardiomyopathien und Phänotypen muskulärer Dysfunktion verknüpft, was Fhod3 zu einem relevanten Ziel für die in-vitro-Modellierung von Mechanismen struktureller Herz- und Muskelerkrankungen macht.

Das FHOD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Fhod3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Fhod3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Fhod3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FHOD3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Fhod3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FHOD3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Fhod3-Exone abzielen, die für die FHOD3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Fhod3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FHOD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom FHOD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Fhod3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FHOD3 HDR-Plasmid (m) und FHOD3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Fhod3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Fhod3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.