Plasmide CRISPR/Cas9 KO FGF-7 (h): sc-401243

Présentation

FGF7 code le facteur de croissance des fibroblastes 7 (FGF-7, également appelé facteur de croissance des kératinocytes), un ligand paracrine produit principalement par les cellules mésenchymateuses, qui signale surtout via FGFR2b sur des cibles épithéliales. Cet axe de signalisation régule la prolifération, la migration et la différenciation épithéliales, et contribue à la réparation tissulaire ainsi qu’au maintien de la barrière via les voies MAPK/ERK, PI3K/AKT et d’autres voies apparentées aux facteurs de croissance en aval. Une dérégulation de la signalisation FGF7–FGFR2b a été impliquée dans l’hyperplasie épithéliale, le remodelage associé à la fibrose et les interactions tumeur–stroma qui influencent la croissance et l’invasion des carcinomes. En tant que facteur modèle du dialogue épithélio-mésenchymateux, FGF-7 est fréquemment étudié dans des contextes tels que la biologie de la cicatrisation, l’homéostasie de l’épithélium des voies aériennes et du tractus gastro-intestinal, et la signalisation induite par le microenvironnement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FGF-7 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FGF7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FGF7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FGF7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FGF-7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FGF7 pour l'étude de la signalisation de FGF-7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FGF7 essentiels à la fonction de FGF-7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FGF7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FGF-7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FGF-7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FGF7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FGF-7 plasmide HDR (h) et le FGF-7 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FGF7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FGF7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.