FGF-19 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401725

Descripción general

FGF19 codifica el factor de crecimiento de fibroblastos 19 (FGF-19), un FGF endocrino que señaliza principalmente a través de FGFR4 en conjunto con el correceptor β-Klotho para regular la homeostasis metabólica. En hepatocitos y enterocitos, FGF-19 participa en el control por retroalimentación de los ácidos biliares al suprimir CYP7A1 e integrarse con programas transcripcionales impulsados por FXR que influyen en el metabolismo de lípidos y glucosa. La señalización aguas abajo activa MAPK/ERK y cascadas de quinasas relacionadas, vinculando a FGF-19 con el crecimiento celular, la diferenciación y la adaptación metabólica específica de cada tejido. La desregulación de la expresión o la señalización de FGF19 se ha asociado con alteraciones del metabolismo de los ácidos biliares y con fenotipos de enfermedad metabólica, y se estudia con frecuencia en el contexto de señalización de crecimiento aberrante en biología del cáncer.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FGF-19 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FGF19 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FGF19 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FGF19 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FGF-19.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FGF19 para la investigación de la señalización de FGF-19, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FGF19 críticos para la función de FGF-19
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FGF19 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FGF-19 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido FGF-19 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FGF19. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FGF-19 (h) y el plásmido HDR FGF-19 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FGF19 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FGF19 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.