FGF-10 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-417825-LAC

FGF10 codifica il fattore di crescita dei fibroblasti 10 (FGF-10), un ligando secreto che segnala preferenzialmente attraverso FGFR2b per regolare la comunicazione epitelio–mesenchima, la proliferazione e la migrazione cellulare, nonché la strutturazione dei tessuti. FGF-10 attiva le cascate canoniche dei recettori tirosin-chinasici, inclusi i segnali MAPK/ERK, PI3K–AKT e PLCγ, influenzando la morfogenesi, il rimodellamento associato alle ferite e il crosstalk stroma–epitelio. Una disregolazione del segnale FGF10/FGFR2b è stata implicata in programmi di sviluppo aberranti e in alterazioni dell’architettura tissutale associate a patologie, inclusi contesti di fibrosi e rimodellamento del microambiente tumorale. In quanto nodo di via con marcati effetti paracrini, FGF10 è spesso studiato per analizzare i programmi trascrizionali guidati dai fattori di crescita e i comportamenti delle linee cellulari epiteliali.

Le particelle di attivazione lentivirale FGF-10 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di FGF10 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FGF-10 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione FGF10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FGF-10. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo FGF10 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.