ferritin heavy chain Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418152-ACT

FTH1 codifica a cadeia pesada da ferritina, uma subunidade ferroxidase do complexo de ferritina que converte Fe2+ em Fe3+ e possibilita o armazenamento de ferro, limitando assim o ferro lábil e o dano oxidativo catalisado por ferro. Ao tamponar o ferro intracelular, FTH1 influencia a homeostase redox, o metabolismo mitocondrial e a rede de elementos responsivos ao ferro/proteínas reguladoras do ferro (IRE/IRP), que coordena a captação, a utilização e o armazenamento de ferro. A cadeia pesada da ferritina também se cruza com programas de resposta ao estresse e vias de morte celular dependentes de ferro, como a ferroptose, por meio do controle da disponibilidade de ferro. A expressão desregulada de FTH1 ou a disfunção da ferritina está associada a respostas alteradas ao estresse oxidativo e ao manejo inadequado do ferro observados na biologia do câncer, em processos neurodegenerativos e em condições inflamatórias.

ferritin heavy chain O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FTH1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ferritin heavy chain O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FTH1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FTH1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ferritin heavy chain. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FTH1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ferritin heavy chain no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ferritin heavy chain em células tumorais com expressão de FTH1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.