Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Fe65 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403226
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Fe65 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Fe65, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Fe65 Anticuerpo (F-6): sc-398389
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Fe65 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403226 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
APBB1 codifica la proteína adaptadora Fe65, un interactor enriquecido en neuronas de la proteína precursora del amiloide (APP) que acopla el tráfico de membrana con la señalización nuclear. Fe65 participa en el procesamiento de APP y en las vías endocíticas mediante la unión, a través de su dominio PTB, a APP y a receptores relacionados, y ensambla complejos multiproteicos con factores como AICD y reguladores transcripcionales para influir en la expresión génica. A través de estas interacciones, Fe65 conecta la función sináptica, la dinámica del citoesqueleto y la proteólisis regulada, procesos que se investigan con frecuencia en estudios sobre neurodegeneración. La alteración de la señalización APP–Fe65 y de los programas transcripcionales aguas abajo se ha estudiado en el contexto de mecanismos relacionados con la enfermedad de Alzheimer y de respuestas más amplias al estrés neuronal.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Fe65 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen APBB1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del APBB1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de APBB1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Fe65.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en APBB1 para la investigación de la señalización de Fe65, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de APBB1 críticos para la función de Fe65
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de APBB1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Fe65 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Fe65 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus APBB1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Fe65 (h) y el plásmido HDR Fe65 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología APBB1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana APBB1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.