FCRLM1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417336-ACT

FCRLA kodiert Fc-Rezeptor-ähnliches A, ein intrazelluläres Protein der FcR-Familie, das überwiegend in Zellen der B-Linie exprimiert wird und mit dem endoplasmatischen Retikulum sowie mit Immunglobulin-haltigen Kompartimenten assoziiert ist. Es wird mit der B‑Zell-Differenzierung und der Immunhomöostase in Verbindung gebracht, indem es den Zusammenbau/Transport von Immunglobulinen und Signalnetzwerke beeinflusst, die antigenabhängige Antworten prägen. Veränderte Expressionsmuster von Fc-Rezeptor-ähnlichen Genen, einschließlich FCRLA, wurden in verschiedenen B‑Zell-Malignomen und autoimmunitätsassoziierten Immunzuständen beschrieben, was seinen Wert als Marker und mechanistischer Knotenpunkt in der B‑Zell-Biologie unterstreicht. Die Untersuchung der Regulation von FCRLA trägt dazu bei, Signalwege zu definieren, die B‑Zell-Aktivierung, Antikörperproduktion und Stressantworten steuern, die mit einer dysregulierten humoralen Immunität verknüpft sind.

FCRLM1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FCRLA-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FCRLM1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FCRLA-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FCRLA-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FCRLM1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FCRLA-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FCRLM1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FCRLM1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FCRLA-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.