FcRH5 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-413461-ACT

FCRL5 (FcRH5) è un recettore immunoregolatorio a espressione ristretta alle cellule B della famiglia dei recettori “Fc receptor–like”, che modula le soglie di segnalazione durante l’attivazione e la differenziazione delle cellule B. Attraverso motivi tirosinici citoplasmatici basati su immunorecettori, FcRH5 influenza vie dipendenti dalla fosforilazione collegate alla segnalazione del recettore delle cellule B, alla risposta alle citochine e all’omeostasi immunitaria. La sua espressione è arricchita in diverse sottopopolazioni di cellule B mature ed è comunemente valutata come marcatore delle transizioni di stato delle cellule B all’interno dei tessuti linfoidi secondari. Una disregolazione dell’espressione di FCRL5 è stata associata ad alterazioni della funzione delle cellule B in contesti di stimolazione immunitaria cronica e in neoplasie derivate da cellule B, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici della biologia delle cellule B e dell’immunologia tumorale.

FcRH5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FCRL5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FcRH5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FCRL5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FCRL5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FcRH5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FCRL5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FcRH5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FcRH5 nelle cellule tumorali con espressione di FCRL5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.