FcRH1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-432859

Übersicht

Fcrl1 kodiert den Fc‑Rezeptor‑ähnlichen 1 (FcRH1), einen mit B‑Zellen assoziierten immunregulatorischen Rezeptor, der an der Feinabstimmung der antigenrezeptor‑getriebenen Signalübertragung und der nachgeschalteten Aktivierungsprogramme beteiligt ist. In lymphatischen Geweben der Maus ist die FcRH1‑Expression mit B‑Zell‑Differenzierungszuständen verknüpft und moduliert frühe Signalereignisse, die mit Signalwegen zusammenlaufen, welche den Kalziumfluss, die MAPK‑Aktivität und transkriptionelle Antworten nach BCR‑Stimulation steuern. Durch die Beeinflussung von Schwellenwerten für B‑Zell‑Aktivierung und ‑Überleben bietet Fcrl1 einen funktionellen Ansatzpunkt zur Untersuchung der Keimzentrumsdynamik, der Immuntoleranz und der Mechanismen, die Antikörperantworten prägen. Fehlregulierte Fc‑Rezeptor‑ähnliche Signalnetzwerke werden häufig im Zusammenhang mit aberranten B‑Zell‑Phänotypen und immunassoziierten Pathologien untersucht, was die Relevanz von Fcrl1 für die mechanistische immunologische Forschung unterstreicht.

Das FcRH1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Fcrl1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Fcrl1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Fcrl1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FcRH1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Fcrl1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FcRH1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Fcrl1-Exone abzielen, die für die FcRH1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Fcrl1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FcRH1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom FcRH1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Fcrl1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FcRH1 HDR-Plasmid (m) und FcRH1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Fcrl1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Fcrl1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.