FBL10 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403232-NIC

ヒトのKDM2BはFBL10タンパク質をコードしており、JmjCドメインをもつヒストン脱メチル化酵素であると同時に、クロマチン関連因子としてCpGアイランドの認識を転写制御へと結び付けます。FBL10は、ヒストンリジンの脱メチル化およびポリコーム関連機構との協調を通じて遺伝子発現のエピジェネティック制御に関与し、クロマチンのアクセス性や発生・分化に関わる遺伝子プログラムに影響を与えます。細胞周期の進行、分化、細胞同一性の維持に関わる経路を調節することで、KDM2B/FBL10の活性は系譜特異的な転写状態の形成に寄与します。KDM2Bの制御異常は、がん性の転写回路の再配線や幹細胞様表現型の変化など、複数の疾患関連状況で報告されており、エピジェネティック制御の機構研究における有用な解析対象（ノード）となっています。

FBL10 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における KDM2B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、KDM2B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、KDM2Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、KDM2Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。