Plasmide CRISPR/Cas9 KO FAST-1 (h): sc-406686

Présentation

FOXH1 code le facteur de transcription à domaine forkhead FAST-1, un médiateur nucléaire de la signalisation de la superfamille TGF-β qui coopère avec les complexes SMAD2/3–SMAD4 pour réguler la transcription responsive à NODAL/Activine. FAST-1 se lie à des motifs forkhead dans les promoteurs cibles et intègre des signaux développementaux contrôlant la spécification du mésendoderme, la mise en place de l’axe gauche–droite et les transitions épithélio-mésenchymateuses via des programmes transcriptionnels dépendants du contexte. Une activité dérégulée de FOXH1 a été associée à des anomalies congénitales de latéralité et à des perturbations du développement embryonnaire précoce, et une altération de la sortie transcriptionnelle TGF-β/SMAD est fréquemment liée à des processus oncogéniques tels que l’invasion et les métastases. Dans des modèles cellulaires, FOXH1 constitue un nœud exploitable pour disséquer l’utilisation des cofacteurs des SMAD, le recrutement de la chromatine et les interactions entre voies de signalisation influençant la différenciation et la plasticité des cellules tumorales.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FAST-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FOXH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FOXH1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FOXH1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FAST-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FOXH1 pour l'étude de la signalisation de FAST-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FOXH1 essentiels à la fonction de FAST-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FOXH1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FAST-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FAST-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FOXH1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FAST-1 plasmide HDR (h) et le FAST-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FOXH1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FOXH1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.