FAST-1/2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420290

Übersicht

Foxh1 (FAST-1/2) ist ein Forkhead-Box-Transkriptionsfaktor, der in der Mausentwicklung als zentraler nukleärer Effektor der Activin/Nodal‑TGF‑β-Signalübertragung fungiert. Durch die Kooperation mit SMAD2/3–SMAD4-Komplexen reguliert er Transkriptionsprogramme, die die Induktion des Mesendoderms, die Festlegung der Links‑Rechts‑Achse und frühe Musterbildungsentscheidungen steuern. Foxh1-abhängige Gennetzwerke überschneiden sich mit Signalwegen, die epitheliale‑mesenchymale Transitionen und die Festlegung von Zellschicksalen regulieren, weshalb Foxh1 häufig als Knotenpunkt genutzt wird, um signalabhängige Transkriptionskontrolle zu untersuchen. Störungen dieser Achse sind sowohl für Entwicklungsfehlbildungen relevant als auch für mechanistische Studien zur TGF‑β‑getriebenen transkriptionellen Reprogrammierung in krankheitsassoziierten Kontexten.

Das FAST-1/2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Foxh1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Foxh1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Foxh1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FAST-1/2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Foxh1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FAST-1/2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Foxh1-Exone abzielen, die für die FAST-1/2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Foxh1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FAST-1/2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom FAST-1/2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Foxh1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FAST-1/2 HDR-Plasmid (m) und FAST-1/2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Foxh1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Foxh1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.