FAPα Plasmide Double Nickase (h): sc-401511-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FAPα Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FAPα Double Nickase Plasmid (h) e il FAPα Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FAP. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FAPα Antibody (SS-13): sc-100528
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FAPα Plasmide Double Nickase (h) | sc-401511-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FAPα Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401511-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La proteina di attivazione dei fibroblasti alfa (FAPα) è una serin-proteasi transmembrana di tipo II della famiglia delle dipeptidil peptidasi S9B, dotata sia di attività dipeptidil peptidasica sia di attività endopeptidasica. È espressa in modo marcato da fibroblasti attivati e da popolazioni stromali e contribuisce al rimodellamento della matrice extracellulare tramite il taglio di substrati ricchi di prolina, influenzando le interazioni cellula–matrice, l’adesione e il comportamento migratorio. L’attività di FAPα si interseca con programmi di segnalazione stromale che regolano il rimodellamento tissutale e i microambienti infiammatori, includendo vie legate agli stati di attivazione dei fibroblasti. Un’alterata espressione di FAP è frequentemente associata al rimodellamento fibrotico e allo stroma associato ai tumori, rendendola un marcatore utile e un nodo funzionale per studiare la regolazione del microambiente in contesti di malattia umana.
FAPα Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FAP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FAP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FAP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FAP interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.