FANCF Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406909

Descripción general

FANCF codifica un componente central de la vía de reparación del ADN de la anemia de Fanconi (FA) que ayuda a ensamblar y estabilizar el complejo central de FA responsable de la monoubiquitinación de FANCD2 y FANCI. Esta modificación coordina la reparación de los entrecruzamientos interhebra del ADN y favorece la protección de la horquilla de replicación mediante la interacción con la recombinación homóloga y la señalización de puntos de control. La función de FANCF contribuye a la estabilidad del genoma durante la fase S, y la pérdida o desregulación de la actividad de la vía de FA se asocia con inestabilidad cromosómica y respuestas alteradas al estrés replicativo. Los defectos genéticos en genes de FA, incluido FANCF, se asocian con la biología de la anemia de Fanconi y se estudian ampliamente en el contexto de los mecanismos de tolerancia al daño del ADN.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FANCF (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FANCF en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FANCF junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FANCF tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FANCF.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FANCF para la investigación de la señalización de FANCF, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FANCF críticos para la función de FANCF
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FANCF para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FANCF CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido FANCF CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FANCF. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FANCF (h) y el plásmido HDR FANCF (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FANCF para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FANCF definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.