FANCC CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416477-ACT

ヒトFANCCは、DNAの鎖間架橋や複製に伴う損傷に対する応答を統括するファンコニ貧血（FA）DNA修復経路の中核構成要素をコードしている。FANCCはFAコア複合体の形成と機能に関与し、FANCD2/FANCIのモノユビキチン化を支えることで、その下流にある相同組換えや複製フォーク安定化機構の動員を促進する。これらの作用を通じて、FANCCはゲノム完全性の維持、細胞周期チェックポイントの協調、ならびに内因性・外因性の遺伝毒性ストレスからの防御に寄与する。FANCCの破綻や機能不全は、ファンコニ貧血の病態と関連するほか、骨髄不全機序やがんに関連するDNA修復脆弱性の研究において重要な、より広範なゲノム不安定性表現型とも結び付いている。

FANCC CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FANCCの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FANCC CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FANCC 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFANCC転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FANCCの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFANCC遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFANCC依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFANCC発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFANCC経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。