FAIM2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404103-ACT

FAIM2 (molécula 2 inibidora da apoptose induzida por Fas), também conhecida como Lifeguard, é uma proteína antiapoptótica associada à membrana que modula a sinalização de receptores de morte e a sobrevivência neuronal. Ela atenua a apoptose mediada por Fas/CD95, influenciando cascatas apoptóticas extrínsecas, a ativação de caspases e vias de resposta ao estresse que regulam decisões sobre o destino celular. A expressão de FAIM2 é enriquecida em tecidos neurais e tem sido associada a mecanismos de neuroproteção, manutenção sináptica e resiliência celular sob estresse inflamatório ou metabólico. A atividade desregulada de FAIM2 tem sido relacionada a alterações na suscetibilidade à apoptose em contextos relevantes para neurodegeneração, fenótipos metabólicos e biologia da sobrevivência de células tumorais.

FAIM2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FAIM2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FAIM2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FAIM2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FAIM2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FAIM2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FAIM2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FAIM2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FAIM2 em células tumorais com expressão de FAIM2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.