Plasmide CRISPR/Cas9 KO Factor XII (h): sc-409611

Présentation

F12 code le facteur XII de la coagulation, un zymogène de sérine protéase qui initie la voie d’activation par contact lors de l’exposition à des surfaces chargées négativement, déclenchant l’activation du FXI et propageant la coagulation intrinsèque. Le facteur XII activé (FXIIa) couple également la coagulation au système kallicréine–kinine en favorisant l’activation de la prékallikréine et la génération de bradykinine, reliant ainsi l’hémostase à l’inflammation et à la perméabilité vasculaire. Par le biais de ces cascades, F12 contribue à la signalisation thrombo-inflammatoire et interfère avec les voies du complément et de l’immunité innée. Une activité du FXII dérégulée est étudiée dans des contextes tels que la biologie de la thrombose, les mécanismes de l’angiœdème et les troubles vasculaires inflammatoires, ce qui fait de F12 un nœud utile pour la dissection des voies dans des modèles sanguins et endothéliaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Factor XII (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène F12 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du F12, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert F12 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Factor XII.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en F12 pour l'étude de la signalisation de Factor XII, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de F12 essentiels à la fonction de Factor XII
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de F12 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Factor XII plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Factor XII plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus F12. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Factor XII plasmide HDR (h) et le Factor XII (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie F12 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles F12 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.