Plasmide CRISPR/Cas9 KO F4/80 (m): sc-420168

Présentation

Adgre1 code l’antigène murin F4/80 (EMR1), un récepteur d’adhésion couplé aux protéines G de la famille EGF‑TM7, fortement exprimé par les macrophages résidents des tissus et des populations myéloïdes apparentées. F4/80 est couramment utilisé pour identifier des sous-populations de macrophages et a été impliqué dans la régulation de la différenciation des macrophages, de leur localisation tissulaire et de l’homéostasie immunitaire via des interactions cellule–cellule et la détection de signaux environnementaux. Ses profils d’expression recoupent des voies contrôlant l’activation de l’immunité innée, la présentation d’antigènes et les réseaux de cytokines inflammatoires au sein des microenvironnements tissulaires. Les variations d’abondance ou de polarisation des macrophages associées à l’expression d’Adgre1/F4/80 sont fréquemment étudiées dans les troubles inflammatoires, les maladies métaboliques, la biologie des infections, la neuroinflammation et la biologie des macrophages associés aux tumeurs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO F4/80 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Adgre1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Adgre1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Adgre1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine F4/80.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Adgre1 pour l'étude de la signalisation de F4/80, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Adgre1 essentiels à la fonction de F4/80
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Adgre1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le F4/80 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le F4/80 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Adgre1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le F4/80 plasmide HDR (m) et le F4/80 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Adgre1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Adgre1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.