F4/80 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420168

Übersicht

Adgre1 kodiert das Mausantigen F4/80 (EMR1), einen Adhäsions‑G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor der EGF‑TM7‑Familie, der vor allem auf gewebeständigen Makrophagen und verwandten myeloischen Zellpopulationen stark exprimiert wird. F4/80 wird häufig zur Identifizierung von Makrophagen‑Subsets verwendet und steht im Zusammenhang mit der Regulation der Makrophagendifferenzierung, der Gewebelokalisation und der Immunhomöostase über Zell‑Zell‑Interaktionen und die Wahrnehmung von Umweltreizen. Seine Expressionsmuster überschneiden sich mit Signalwegen, die die angeborene Immunaktivierung, die Antigenpräsentation und Netzwerke inflammatorischer Zytokine innerhalb von Gewebemikroumgebungen steuern. Veränderungen in Häufigkeit oder Polarisierung von Makrophagen, die mit der Adgre1/F4/80‑Expression assoziiert sind, werden häufig bei entzündlichen Erkrankungen, Stoffwechselkrankheiten, Infektionsbiologie, Neuroinflammation und der Biologie tumorassoziierter Makrophagen untersucht.

Das F4/80 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Adgre1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Adgre1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Adgre1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die F4/80-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Adgre1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der F4/80-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Adgre1-Exone abzielen, die für die F4/80-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Adgre1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom F4/80 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom F4/80 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Adgre1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das F4/80 HDR-Plasmid (m) und F4/80 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Adgre1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Adgre1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.