EY-cadherin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401988

Übersicht

CDH18 kodiert das humane EY-Cadherin, ein Mitglied der klassischen Cadherin-Familie, das Ca²⁺-abhängige Zell-Zell-Adhäsion vermittelt und zur Gewebearchitektur beiträgt, indem es Adhärenzverbindungen über Catenin-Komplexe an das Aktin-Zytoskelett koppelt. Durch die Regulierung des interzellulären Zusammenhalts, der Polarität und kontaktabhängiger Signalwege kann CDH18 Prozesse beeinflussen, die mit der epithelialen und neuronalen Organisation verknüpft sind, darunter Migration und Grenzflächenbildung. Veränderte Cadherin-Expression und eine beeinträchtigte Integrität von Zellkontakten sind in krankheitsrelevanten Modellen häufig mit gestörter Differenzierung und invasivem Verhalten assoziiert, weshalb CDH18 ein nützlicher Ansatzpunkt zur Untersuchung adhesionsgetriebener Phänotypen ist. Expressionsmuster von CDH18 sowie genetische oder epigenetische Störungen wurden in Kontexten untersucht, in denen Zellidentität und Konnektivität beeinträchtigt sind, darunter Krebs und neuroentwicklungsbezogene Störungen.

Das EY-cadherin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CDH18-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CDH18-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CDH18 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die EY-cadherin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CDH18-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der EY-cadherin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CDH18-Exone abzielen, die für die EY-cadherin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CDH18-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom EY-cadherin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom EY-cadherin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CDH18-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das EY-cadherin HDR-Plasmid (h) und EY-cadherin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CDH18-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CDH18-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.