EXT1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-420252-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- EXT1 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- EXT1ダブルニカースプラスミド（m）およびEXT1ダブルニカースプラスミド（m2）は、Ext1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: EXT1 抗体 (A-7): sc-515144
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
EXT1 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-420252-NIC | 20 µg | $410.00 |
マウスEXT1は、外骨腫グリコシルトランスフェラーゼ1（EXT1）をコードしており、ゴルジ体におけるヘパラン硫酸鎖の伸長反応を触媒するEXT1/EXT2複合体の必須構成要素である。ヘパラン硫酸プロテオグリカンの生合成を制御することで、EXT1はリガンド–受容体相互作用や勾配形成を調節し、FGF、Wnt、Hedgehog、BMPシグナル伝達などの経路に影響を及ぼす。さらに、EXT1に依存したグリコサミノグリカン構造は、細胞外マトリックスの構築、細胞接着、モルフォゲンや増殖因子のエンドサイトーシス輸送にも影響する。EXT1機能の破綻は、骨格形成の異常や組織パターニングの変化と関連しており、ヘパラン硫酸により制御されるシグナル伝達とマトリックス生物学を研究するうえで重要な標的である。
EXT1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Ext1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Ext1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Ext1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Ext1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。