Plásmido CRISPR de Activación (h) EXT1: sc-404635-ACT

El gen humano **EXT1** codifica la exostosina-1, una glicosiltransferasa residente del aparato de Golgi que forma un complejo funcional con **EXT2** para catalizar la elongación de las cadenas de **heparán sulfato** en los proteoglicanos. Al controlar la biosíntesis de heparán sulfato, **EXT1** determina la organización de la matriz extracelular y modula la disponibilidad de ligandos para vías de señalización clave, incluidas **FGF, WNT, Hedgehog y BMP**, influyendo en la adhesión y migración celular, así como en los patrones del desarrollo. La disrupción o desregulación de **EXT1** altera la composición de los proteoglicanos y los gradientes de señalización, y se asocia fuertemente con displasias esqueléticas como las **osteocondromas múltiples** y con defectos más amplios en la morfogénesis tisular. La actividad de **EXT1** también es relevante en estudios sobre la remodelación del microambiente tumoral y las interacciones receptor–ligando que dependen de la presentación de heparán sulfato.

EXT1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EXT1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EXT1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EXT1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EXT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EXT1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EXT1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EXT1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EXT1 en células tumorales con expresión de EXT1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.