Plasmide CRISPR/Cas9 KO Evx-1 (m): sc-420249

Présentation

Evx1 code le facteur de transcription à homéoboîte Evx-1, un régulateur du développement qui participe à la mise en place du plan de l’embryon et contribue à spécifier les décisions de destin cellulaire le long de l’axe antéro-postérieur. Chez la souris, Evx-1 prend part à des réseaux transcriptionnels qui coordonnent la morphogenèse, notamment des programmes géniques associés au patronage du tube neural, à la régionalisation du rhombencéphale et de la moelle épinière, ainsi qu’au développement des somites. En tant que protéine se liant à l’ADN de manière spécifique de la séquence, Evx-1 influence les voies de signalisation et de différenciation en aval en contrôlant des états transcriptionnels restreints à certaines lignées. L’activité dérégulée des gènes à homéoboîte, y compris des programmes EVX1 altérés, est étudiée pour son impact sur les malformations congénitales et les phénotypes de différenciation aberrants dans des modèles de développement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Evx-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Evx1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Evx1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Evx1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Evx-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Evx1 pour l'étude de la signalisation de Evx-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Evx1 essentiels à la fonction de Evx-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Evx1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Evx-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Evx-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Evx1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Evx-1 plasmide HDR (m) et le Evx-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Evx1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Evx1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.