ERRβ CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402868-ACT

ESRRBは、エストロゲン関連受容体ベータ（ERRβ）をコードしており、細胞のエネルギーホメオスタシス、ミトコンドリア生合成、酸化的代謝を制御する遺伝子プログラムを調節する、オーファン核内受容体型の転写因子です。ERRβは特定のDNA応答配列に結合し、共役因子（コレギュレーター）と相互作用することで、分化や細胞状態の維持に関連する転写ネットワークを調整します。ヒト細胞では、ESRRBの活性は核内受容体シグナル伝達や代謝経路と交差し、増殖、ストレス適応、系譜（ラインエージ）決定などの過程に影響を及ぼします。ERRβに関連する転写制御の破綻は、発生異常やがんに関連した代謝リモデリングなどの文脈で研究されています。

ERRβ CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ESRRBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ERRβ CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ESRRB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はESRRB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ERRβの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のESRRB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるERRβ依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびESRRB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるERRβ経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。