Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ERp72 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402689
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- ERp72 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico ERp72, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ERp72 Anticuerpo (B-4): sc-390530
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
ERp72 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402689 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PDIA4 codifica ERp72, un miembro de la familia de isomerasas de disulfuro de proteínas residente en el retículo endoplásmico (RE) que cataliza reacciones de intercambio tiol–disulfuro para apoyar el plegamiento oxidativo y el control de calidad de proteínas secretadas y de membrana. ERp72 actúa dentro de la red de proteostasis del RE junto con chaperonas y otras PDI, contribuyendo a la señalización de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR), a la degradación asociada al RE (ERAD) y al mantenimiento de la homeostasis redox en condiciones de estrés del RE. Al modular la maduración de proteínas cliente y limitar el estrés proteotóxico, PDIA4 influye en vías vinculadas a la secreción, el procesamiento de antígenos y la adaptación celular a perturbaciones del plegamiento proteico. La capacidad de plegamiento del RE desregulada y el estrés crónico del RE están implicados en la biología del cáncer, las enfermedades metabólicas y los procesos neurodegenerativos, lo que convierte a PDIA4 en un nodo útil para estudios mecanísticos de señalización de estrés y control de calidad del proteoma.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO ERp72 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PDIA4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PDIA4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PDIA4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ERp72.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PDIA4 para la investigación de la señalización de ERp72, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PDIA4 críticos para la función de ERp72
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PDIA4 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido ERp72 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ERp72 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PDIA4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ERp72 (h) y el plásmido HDR ERp72 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PDIA4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PDIA4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.