ERM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-430518
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- ERM Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im ERM-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ERM: sc-100941
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ERM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-430518 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Etv5 kodiert den zur ETS-Familie gehörenden Transkriptionsfaktor ERM, einen sequenzspezifischen Regulator der Genexpression, der Signale aus MAPK/ERK- und Rezeptor-Tyrosinkinase-Signalwegen integriert, um Proliferation, Differenzierung und Entscheidungen über das Zellschicksal zu steuern. In der Mausentwicklung trägt ERM zur Organogenese und Gewebehomöostase bei, indem es Transkriptionsprogramme moduliert, die mit der Aufrechterhaltung von Stamm-/Vorläuferzellen und der Festlegung von Zelllinien (Lineage Commitment) verknüpft sind. Die Etv5-Aktivität wurde mit Signalwegen in Verbindung gebracht, die die Funktion von Sertoli-Zellen, neuronale und epitheliale Differenzierung sowie adaptive Antworten auf Wachstumsfaktor-Stimulation steuern. Eine fehlregulierte Signalgebung von ETS-Faktoren, einschließlich veränderter ETV5/ERM-abhängiger Transkriptionsnetzwerke, wird häufig in Modellen der Tumorentstehung, Invasion und Resistenzphänotypen untersucht, ohne damit klinische Behandlungsergebnisse zu implizieren.
Das ERM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Etv5-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Etv5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Etv5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ERM-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Etv5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ERM-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Etv5-Exone abzielen, die für die ERM-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Etv5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom ERM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ERM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Etv5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ERM HDR-Plasmid (m) und ERM HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Etv5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Etv5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.