Plasmide Double Nickase (h) ERF: sc-403877-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ERF correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ERF Double Nickase (h) et le plasmide ERF Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ERF. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ERF Antibody (E-9): sc-398269
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ERF | sc-403877-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ERF | sc-403877-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ERF (ETS2 repressor factor) est un facteur de transcription de la famille ETS exprimé de façon ubiquitaire, qui se lie aux motifs GGAA/T afin de réguler des programmes géniques contrôlant la prolifération, la différenciation et l’homéostasie cellulaire. Il agit en aval de la signalisation MAPK/ERK, où des changements de localisation et d’activité d’ERF dépendants de la phosphorylation modulent la dynamique de répression et d’activation transcriptionnelles. ERF contribue à la régulation de voies du développement et de l’hématopoïèse et s’insère dans des réseaux transcriptionnels plus larges qui influencent le contrôle du cycle cellulaire et les réponses au stress. Une activité ou une expression dérégulée d’ERF a été associée à une altération de la sortie de la voie MAPK et impliquée dans des contextes tels que des phénotypes du développement cranio-facial et le remodelage transcriptionnel lié au cancer.
ERF Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ERF dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ERF. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ERF. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ERF.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.