ER71 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420239-ACT

マウスEtv2は、初期胚発生における血管内皮系（hematoendothelial）系譜の規定を司るマスター制御因子であるETSファミリー転写因子ER71をコードする。ER71は発生シグナルからの入力を統合し、血管形態形成、内皮分化、造血系譜の出現を駆動する転写プログラム（内皮の主要遺伝子ネットワークの制御を含む）を制御する。Etv2の活性は、血管新生および脈管形成を制御する経路と交差しており、その制御異常は、実験系において心血管発生の欠陥や異常な内皮アイデンティティをモデル化するために用いられている。Etv2は一過性に発現し、かつ用量が厳密に制御されているため、内皮および血液前駆細胞の運命決定を検証するリプログラミング手法や系譜追跡（lineage tracing）ワークフローで広く研究されている。

ER71 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Etv2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ER71 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Etv2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEtv2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ER71の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEtv2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるER71依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEtv2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるER71経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。