Plásmido CRISPR de Activación (h) Epiregulin: sc-404273-ACT

EREG codifica epiregulina, un ligando secretado de la familia EGFR/ERBB que modula la señalización epitelial y estromal de manera dependiente del contexto. Al unirse a EGFR y ERBB4, la epiregulina activa las cascadas de señalización MAPK/ERK, PI3K–AKT y JAK/STAT, que regulan la proliferación, la diferenciación, la migración y el diálogo inflamatorio entre células. La expresión de EREG suele ser inducible por citocinas y factores de crecimiento, y contribuye a programas de reparación de heridas, remodelado tisular y comunicación paracrina dentro del microambiente tumoral. La desregulación de EREG se ha asociado con señalización oncogénica, fenotipos de invasión y alteraciones en las interacciones inmuno‑epiteliales, lo que respalda su utilidad como nodo mecanístico en biología del cáncer e investigación en inflamación.

Epiregulin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EREG sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Epiregulin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EREG en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EREG, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Epiregulin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EREG y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Epiregulin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Epiregulin en células tumorales con expresión de EREG silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.