Epidermis-type 12-LO Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419088

Descripción general

Alox12b codifica la 12-lipooxigenasa tipo epidermis (12-LO), una dioxigenasa dependiente de hierro no hemo que oxida ácidos grasos poliinsaturados esterificados para generar intermediarios lipídicos hidroperóxidos. En la epidermis del ratón, ALOX12B actúa dentro de la vía de las lipooxigenasas que sustenta el procesamiento de las acilceramidas y la formación de la barrera lipídica del estrato córneo, coordinando la diferenciación terminal de los queratinocitos y la cornificación. La alteración de la actividad de la 12-LO afecta la homeostasis lipídica epidérmica, la señalización oxidativa mediada por lípidos y la integridad de la barrera; procesos que se estudian con frecuencia en modelos de fenotipos tipo ictiosis, dermatitis y estrés cutáneo inflamatorio. Como resultado, Alox12b es un punto de partida útil para desentrañar las contribuciones del metabolismo lipídico a la función de barrera epitelial y a la señalización inmunitaria cutánea.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Epidermis-type 12-LO (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Alox12b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Alox12b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Alox12b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Epidermis-type 12-LO.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Alox12b para la investigación de la señalización de Epidermis-type 12-LO, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Alox12b críticos para la función de Epidermis-type 12-LO
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Alox12b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Epidermis-type 12-LO CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Epidermis-type 12-LO CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Alox12b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Epidermis-type 12-LO (m) y el plásmido HDR Epidermis-type 12-LO (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Alox12b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Alox12b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.