EPHX2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402095-ACT

EPHX2は可溶性エポキシド加水分解酵素（sEH）をコードしており、エポキシエイコサトリエン酸（EETs）などの生理活性をもつエポキシ脂肪酸を、活性の低いジオールへと変換する二機能性酵素である。この働きにより、血管・腎臓・免疫の各文脈における脂質メディエーターのトーン（作用バランス）が調整される。アラキドン酸をはじめとするオキシリピン代謝におけるこの役割を通じて、EPHX2は炎症の収束、内皮機能、酸化ストレス応答、血圧調節に関連するシグナル伝達ネットワークに影響を及ぼす。sEH活性の変化やEPHX2発現パターンの異常は、心代謝形質、高血圧関連経路、炎症性疾患の機序と関連づけられており、脂質エポキシドの代謝回転を対象とした機構研究の動機となっている。細胞モデルでは、EPHX2の調節を用いて、脂質シグナル伝達、サイトカインプログラム、ストレス応答性の転写反応のクロストークを解析する。

sEH CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EPHX2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

sEH CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EPHX2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEPHX2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性sEHの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEPHX2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるsEH依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEPHX2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるsEH経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。