ephrin-A5 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-420123-NIC

Efna5 codifica a efrina-A5, um ligante ancorado por GPI para as tirosina-quinases receptoras EphA, que medeia sinalização dependente de contato para coordenar o posicionamento celular, a formação de fronteiras e a orientação axonal durante o desenvolvimento do sistema nervoso. As interações efrina-A5–EphA regulam a remodelação do citoesqueleto e a dinâmica de adesão por meio de GTPases da família Rho, afetando o crescimento de neuritos, o direcionamento sináptico e o padrão tecidual. Em modelos murinos, alterações na sinalização da efrina-A5 têm sido associadas a defeitos no mapeamento de axônios corticotalâmicos e retinianos, na circuitaria do hipocampo e em outros processos do neurodesenvolvimento. A desregulação das vias Eph/efrina também é estudada em contextos de migração e invasão celular aberrantes, tornando o Efna5 um alvo relevante para pesquisas mecanísticas em neurobiologia do desenvolvimento e sinalização associada a doenças.

ephrin-A5 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Efna5 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Efna5. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Efna5. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Efna5 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.