ephrin-A3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402771-NIC

EFNA3は、Eph受容体チロシンキナーゼのグリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型リガンドであるエフリンA3をコードしており、細胞接触依存的なシグナル伝達を介して細胞の配置、境界形成、軸索誘導を協調的に制御します。エフリンA3とEphの相互作用は、細胞骨格の再編成や接着動態、さらに双方向性シグナル伝達を調節し、RhoファミリーGTPアーゼやMAPK/ERKシグナルに関連する経路を通じて、細胞移動や組織パターニングに影響を与えます。ヒトの生体においては、エフリン/Ephシグナルの異常が、がんを含む複数の疾患状況で、血管新生の制御異常、浸潤性の亢進、微小環境とのクロストークの乱れなどと関連していることが報告されています。そのためEFNA3は、細胞間コミュニケーション、発生プログラム、腫瘍進展や血管生物学に関わるリモデリング過程の機構解明において研究対象となっています。

ephrin-A3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EFNA3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EFNA3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EFNA3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EFNA3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。