ephrin-A3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402771-ACT

EFNA3は、EphA受容体型チロシンキナーゼのGPI（グリコシルホスファチジルイノシトール）アンカー型リガンドであるエフリンA3をコードしており、接触依存的な細胞間コミュニケーションを媒介します。エフリンA3/EphAシグナルは、細胞骨格の再構築、細胞接着、方向性移動を制御し、RhoファミリーGTPアーゼやMAPK依存性プログラムなどの経路を介して、組織境界の形成、軸索ガイダンス、血管パターニングに影響を与えます。哺乳類システムでは、エフリン–Ephシグナルの変化が、複数の疾患状況において神経回路結合性の変化、血管新生リモデリング、浸潤性表現型と関連づけられており、EFNA3は微小環境シグナル伝達を研究するうえで有用な結節点となります。したがってヒトEFNA3の活性は、膜に係留されたシグナルが分化、運動性、組織構築をどのように形作るかを解明するために重要です。

ephrin-A3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EFNA3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ephrin-A3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EFNA3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEFNA3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ephrin-A3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEFNA3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるephrin-A3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEFNA3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるephrin-A3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。