Plasmide CRISPR/Cas9 KO EphB6 (m): sc-420202

Présentation

Ephb6 code pour EphB6, un membre de la famille des récepteurs tyrosine kinases Eph, qui participe à une signalisation dépendante du contact avec les ligands éphrine‑B afin de réguler la communication cellule–cellule. Bien qu’EphB6 présente une activité kinase diminuée par rapport à d’autres récepteurs EphB, il module l’agrégation des récepteurs et des voies en aval contrôlant le remodelage du cytosquelette, l’adhérence cellulaire et la migration directionnelle, avec des liens avec la signalisation des petites GTPases de la famille Rho et des interactions (crosstalk) entre les réseaux MAPK et PI3K. Dans les systèmes murins, EphB6 est étudié dans des processus tels que l’activation des cellules immunitaires et l’organisation tissulaire, où des gradients éphrine–Eph déterminent le positionnement cellulaire. Une dérégulation de la signalisation associée à EphB6 a été examinée dans des contextes d’altération du comportement épithélial et de phénotypes liés aux tumeurs, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour l’étude du contrôle de la croissance et des interactions avec le microenvironnement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EphB6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ephb6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ephb6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ephb6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EphB6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ephb6 pour l'étude de la signalisation de EphB6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ephb6 essentiels à la fonction de EphB6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ephb6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le EphB6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le EphB6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ephb6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le EphB6 plasmide HDR (m) et le EphB6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ephb6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ephb6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.