EphA3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401565-ACT

EPHA3はEphA3受容体型チロシンキナーゼをコードしており、細胞接触依存的なシグナル伝達を介して細胞の位置決め、接着、組織境界の形成を調節するephrin–Ephファミリーの一員です。膜に係留されたephrin-Aリガンドに結合すると、EphA3は双方向性シグナル伝達を開始し、アクチン細胞骨格を再編成するとともに、RhoファミリーGTPアーゼ依存性プログラムや下流のキナーゼシグナル伝達を含む、細胞遊走および誘導を制御する経路を調節します。EphA3の活性は、軸索誘導や血管パターニングなどの発生過程に関与することが示されており、またEPHA3の発現やシグナル伝達の変化は、複数のがんの状況において、腫瘍細胞の浸潤、微小環境との相互作用、ならびに腫瘍性経路の再配線と関連付けられています。これらの特性により、EPHA3は、ヒト細胞における受容体駆動型コミュニケーションネットワークや文脈特異的な表現型可塑性を解明するための有用な標的となります。

EphA3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EPHA3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EphA3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EPHA3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEPHA3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EphA3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEPHA3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEphA3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEPHA3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEphA3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。