EP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402485

Übersicht

PTGER3 kodiert den Prostaglandin‑E2‑Rezeptor EP3, einen rhodopsinähnlichen GPCR, der an Gi/o (und in bestimmten Kontexten auch an Gq) koppelt, um die Aktivität der Adenylatcyclase, die cAMP‑Signalübertragung und nachgeschaltete Kinasewege zu regulieren. Die Aktivierung von EP3 moduliert u. a. Entzündungsprozesse, den Gefäß‑ und glatten Muskeltonus, die Thrombozytenfunktion sowie die Regulation epithelialer Barrieren – über eine kontextabhängige Steuerung von Second Messengern und transkriptionellen Antworten. PTGER3 ist Teil von Eicosanoid‑ und Arachidonsäure‑Signalnetzwerken, die COX‑abgeleitete Prostaglandin‑Signale mit Immun‑ und Stoffwechselprogrammen verknüpfen. Eine fehlregulierte EP3‑Signalgebung wurde mit entzündlichen und kardiometabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht und wird häufig in Krebs‑ und Mikroumgebungsstudien untersucht, in denen Prostaglandinwege Proliferation, Migration und Immunflucht beeinflussen.

Das EP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PTGER3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PTGER3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PTGER3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die EP3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PTGER3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der EP3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PTGER3-Exone abzielen, die für die EP3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PTGER3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom EP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom EP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PTGER3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das EP3 HDR-Plasmid (h) und EP3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PTGER3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PTGER3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.