Eos CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402330

Übersicht

IKZF4 (Eos) ist ein Zinkfinger-Transkriptionsfaktor aus der Ikaros-Familie, der Genexpressionsprogramme reguliert, welche die Differenzierung, Aktivierung und Toleranz von Lymphozyten steuern. In humanen T-Zellen wird Eos besonders stark in regulatorischen T-Zellen exprimiert und trägt zur Aufrechterhaltung ihrer suppressiven Identität bei, indem es transkriptionelle Repression sowie chromatinassoziierte Kontrolle von Genen für Immun-Effektorfunktionen koordiniert. Durch die Einbindung in transkriptionelle und epigenetische Netzwerke beeinflusst IKZF4 die Reaktionsfähigkeit auf Zytokinsignale, TCR-getriebene Aktivierungszustände und die Stabilität der Zelllinie. Eine fehlregulierte IKZF4/Eos-Funktion wurde mit veränderter Immunhomöostase in Verbindung gebracht und in Zusammenhängen wie Autoimmunität, Entzündung und der Immunonkologie untersucht.

Das Eos CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des IKZF4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des IKZF4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von IKZF4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Eos-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von IKZF4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Eos-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf IKZF4-Exone abzielen, die für die Eos-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere IKZF4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Eos CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Eos CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des IKZF4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Eos HDR-Plasmid (h) und Eos HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von IKZF4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten IKZF4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.